化学检验
(一)血液检查 红细胞和血红蛋白增高 ,白细胞计数10~20×109/L(1万~2万/mm3)或更高,中性粒细胞及大单核细胞增多。血清钾、钠、氯化物和碳酸盐降低,血pH下降,尿素氮增加。治疗前由于细胞内钾离子外移,血清钾可在正常范围内,当酸中毒纠正后,钾离子移入细胞内而出现低钾血症。
(二)尿检查 少数病人尿中可有蛋白、红白细胞及管型。
(三)病原菌检查
1.常规镜检 可见粘液和少许红、白细胞。
2.涂片染色 取粪便或早期培养物涂片作革兰染色镜检,可见革兰阴性稍弯曲的弧菌。
3.悬滴检查 将新鲜粪便作悬滴或暗视野显微镜检,可见运动活泼呈穿梭状的弧菌。
4.制动试验 取急性期病人的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物,先作暗视野显微镜检,观察动力。如有穿梭样运动物时,则加入01群多价血清一滴,若是01群霍乱弧菌,由于抗原抗体作用,则凝集成块,弧菌运动即停止。如加01群血清后,不能制止运动,应再用0139血清重作试验。
5.增菌培养 所有怀疑霍乱患者粪便,除作显微镜检外,均应作增菌培养。粪便留取应在使用抗菌药物之前,且应尽快送到实验室作培养。增菌培养基一般用pH8.4的碱性蛋白胨水,36~37℃培养6~8小时后表面能形成菌膜。此时应进一步作分离培养,并进行动力观察和制动试验,这将有助于提高检出率和早期诊断。
6.分离培养 常用庆大霉素琼脂平皿或碱性琼脂平板。前者为强选择性培养基,36~37℃培养8~10小时霍乱弧菌即可长成小菌落。后者则需培养10~20小时。选择可疑或典型菌落,应用霍乱弧菌“0”抗原的抗血清作玻片凝集试验,若阳性即可出报告。近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针,作菌落杂交,可迅速鉴定出产毒01群霍乱弧菌。
7.PCR检测 新近国外应用PCR技术来快速诊断霍乱。其中通过识别PCR产物中的霍乱弧菌毒素基因亚单位CtxA和毒素协同菌毛基因(TcpA)来区别霍乱菌株和非霍乱弧菌。然后根据TcpA基因的不同DNA序列来区别古典生物型和埃尔托生物型霍乱弧菌。4小时内可获结果,据称能检出每ml碱性蛋白胨水中10条以下霍乱弧菌。
8.鉴别试验 古典生物型、埃尔托生物型和0139型霍乱弧菌的鉴别。
实验室检查
常规 项目
(一)血常规及生化检查
Wbc↑N↑Rbc↑Na+↓k+↓cl-HCO-3↓Bun↑cr↑
(二)尿常规 镜检 少许Rbc WBC Pro 管型
(三)粪便检查
1、常规检查 黏液 少许Rbc Wbc
2、涂片染色 革兰氏阴性弯曲弧菌
3、悬滴检查 运动活泼呈穿梭壮的弧菌
4、制动试验 碱性胨水 6H 生长物
5、增菌培养PH8.4碱性蛋白胨水 36~37℃6 ~8H→ 菌膜→动力 制动 分离培养
6、分离培养 O抗原的抗血清作玻片凝集试验
(四)血清免疫学检查 抗菌抗体 抗肠毒素抗体 抗凝集素
抗体 双 份血清滴度4倍以上升高
1、菌株的常规鉴定
对获得的所有霍乱弧菌菌株均必须由各级疾病预防控制中心进行O1或O139群血清学分群(型);以县(区、市)为单位的首发病例的菌株必须进行系统的生化鉴定、试管凝集试验、生物学分型、噬菌体-生物分型、药敏试验等项目;其余菌株的鉴定项目由各省疾病预防控制中心按实际情况确定。
2、霍乱毒素基因检测
各省疾病预防控制中心负责全部菌株的毒素基因(CT)检测(按《霍乱防治手册》第五版第82 页的引物序列及PCR 扩增方法),不具备检测条件的省疾病预防控制中心可送国家疾病预防控制中心检测。
3、菌株脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析
PFGE 的检测工作由国家疾病预防控制中心或有条件的省疾病预防控制中心按PulseNet China 要求的标准方法完成。疾病预防控制中心负责选择代表性菌株开展菌株的PFGE 分析。各省疾病预防控制中心实验室对当年菌株的分离和分析情况,按“霍乱菌株实验室检测结果汇总表”的项目进行汇总,按年逐级上报。
4、检查
(1)直接镜检:
①直接涂片染色:将标本涂片,固定后用1∶10稀释石炭酸复红染色和革兰氏染色,镜检有无典型弧菌。典型霍乱弧菌互相连接平行排列,有如“鱼群”。
②悬滴标本:将标本制成悬滴,镜检细菌动力,最好用暗视野显微镜。霍乱弧菌运动活泼,呈小鱼穿梭状。
(2)分离培养:将吐泻物直接或先经碱性胨水增菌后,接种于庆大霉素琼脂等培养基,容易检出霍乱弧菌。应用荧光抗体检测粪便中霍乱弧菌,可于1~2小时内获得结果。
(3)血清学检查:可作血清凝集试验。在发病第1~3日及第10~15日各取1份血清,若第2份血清的抗体效价比第1份增高4倍或4倍以上,有诊断参考价值。
(4)制动试验——快速诊断:在急性病人的水样便中含有大量弧菌,如悬滴检查阳性,再滴加不含防腐剂的霍乱多价血清(使用浓度为1∶64),几分钟内细菌运动停止,凝集成块即为阳性。
专家提醒
现在人们很少听到霍乱 病例,不过该传染病其实一直都有零散地发生,2009年江苏有两例零散霍乱报告,2008年有8例。
据有关专家介绍,近十多年来,江苏的霍乱疫情一直处于散发平稳状态,即使这一次出现了霍乱疫情,也是一个“孤立事件”,只要严格按照程序,完全可以妥善处置。
专家提醒,霍乱具有发病急、传播快、波及面广的特点。感染霍乱后,有的只有轻微腹泻或者根本没有症状,有的表现为剧烈的无痛性水样腹泻。感染霍乱后,如果治疗不及时或不恰当,会引起严重脱水导致死亡。一般在6~9月份是流行高峰。对于霍乱,人群普遍容易感染,胃酸缺乏者尤其易感。[2]
疫情
案例一:2010年9月9日金陵晚报报道江苏出现近年来首起集体霍乱疫情,淮安一中学19名学生确认感染霍乱。这是近年来报告人数最多的一起霍乱疫情。江苏省卫生厅通报中还表示,疫情已得到有效控制。
案例二:2010年10月21日,据外电报道,海地卫生官员21日表示,已有近140人因不明原因的急性腹泻传染病而死亡。2010年10月22日,当地卫生官员确定爆发的急性腹泻传染病为霍乱。这次爆发的疫情是震灾后最严重的公共卫生事件。据了解当地恶劣的卫生条件(尤其是饮水卫生条件)是爆发霍乱的主要原因。11月17日已经有超过1000人死于霍乱。霍乱几乎蔓延到海地的各个省份,有超过16000人目前在医院中接受治疗。医疗专家和流行病学专家此前预测称,海地霍乱疫情蔓延恐将造成20万人感染。他们强调须加强对当地民众医疗知识的普及,使他们能够及时寻求治疗。
海地的第二大城市海地角有谣传称,霍乱是联合国维和部队带来的,居民受到鼓动开始示威。他们临街纵火,攻击联合国人员,骚乱已经持续3天,导致至少2人死亡,多人受伤。当地的棒球场现在充当临时医院,因为街道被示威者霸占,车辆难以通过,许多病患根本到不了医院,耽误治疗。同时,疫情迅速蔓延,仅17日一晚,就新增了200多名病患。
联合国在海地驻扎了1万多名军警,联合国已否认海地这次霍乱是通过一名尼泊尔籍军人从境外带入海地的说法。
报道称,西半球上次出现霍乱疫情已是将近20年前的事。当时,从秘鲁开始的疫情扩散到16个国家。从1991年到1997年,秘鲁累计有超过65万人感染霍乱。
海地持续一个多月的霍乱疫情,目前仍处于失控状态。截至昨天,全国10个省中已有8个暴发霍乱,造成至少1200人死亡,近两万人住院治疗。在疫情发源地海地第二大城市海地角,疫情已遍布城郊各地,过去一周,每天大约有30到65名患者被送往医院,死亡率甚至高达7.5%。